Ембріон курки. Методи експериментального зараження курячих ембріонів
Мета заняття:ознайомити студентів із методами зараження курячих ембріонів для культивування вірусів.
Обладнання та матеріали:курячі ембріони 9-12 денного віку інкубації, овоскоп, спиртові тампони, підставки для ембріонів, пінцети, ножиці, лейкопластир, голки, шприци, прості олівці, пробійники, голочки, таблиці, схеми, мультимедійне обладнання, презентації MS Office Power Pointна тему заняття.
Пояснення викладача.
Істотно впливає розмноження вірусів в ембріонах метод зараження. Перед зараженням інкубовані яйця про-свічують, загиблі відокремлюють. На шкаралупі яєць з живими ембріонами, які розрізняють по червоному кольору кровоносних судин та руху ембріона, олівцем відзначають місце зараження.
Заражають ембріони в стерильному боксі, що має робочий стіл, два табурети, підведення газу, водопровід і вакуум. Зараження в амніотичну порожнину проводять у затемненій кімнаті. Робоче місцемає бути добре освітлено. Перед роботою стіл дезінфікують. Для дезінфекції поверхні яєць готують антисептичний розчин (70%-ний спирт, 2%-ний розчин йоду) і обгорнуту ватою дерев'яну паличку, зігнутий зубний зонд або бормашину для просвердлювання. яєчної шкаралупи. Яйця заражають за допомогою стерильних шприца для туберкулінізації та спеціальних голок. Місце зараження на яйці заливають парафіном. Для цього готують парафінові палички: у пробірку, заповнену розплавленим парафіном, вводять скляну паличку, стежачи за тим, щоб вона знаходилася в центрі пробірки до остигання парафіну.
Коли парафінова паличка знадобиться, стінки пробірки нагрівають на горілці і за скляну паличку витягують парафін із пробірки. Потримавши паличку над полум'ям, розплавляють необхідну закриття отвори в яйці кількість парафина. Цей спосіб дуже чистий, і за нього не утворюються пари парафіну.
Крім того, на робочому столі в боксі розміщують склянку зі стерильними ватними тампонами, склянку з 3% розчином їдкого натру для використаних інструментів і посудину з розчином хлораміну для використаних скляних предметів. У разі потреби можна приготувати підставку для яєць, невелику емальовану чашку та стерильні живильні середовища. Підготовлений таким чином робочий стіл протягом 1-2 год піддають УФ-опромінення.
Враховуючи патогенність досліджуваних вірусів, роботи ведуть у масці, гумових рукавичках і захисних окулярах.
Існує шість методів зараження ембріонів. Найчастіше використовують зараження в алантоїсну порожнинуі на хоріоналантоїсну оболонку, рідше - в амніотичну порожнину і в жовтковий мішечокі дуже рідко - у тіло зародка й у кровоносні судини ХАО. Вибір методу визначається тропізмом вірусу, і навіть метою зараження. За будь-якого методу зараження вводять 0,1-0,2 мл інфекційного матеріалу.
Зараження в алантоїсну порожнину.
При зараженні цим методом добре розмножуються віруси грипу, ньюкаслської хвороби, ринопневмонії коней, везикулярного стоматиту та ін. Існує кілька варіантів методу.
Перший варіант.Ембріон фіксують вертикально тупим кінцем нагору. У шкаралупі за зародка, інколи ж з протилежної зародку боку на 5-6 мм вище межі повітряної камери роблять отвір діаметром близько 1 мм. Голку вводять паралельно поздовжній осі на глибину 10-12 мм (рис. 16). Після ін'єкції вірусовмісного матеріалу голку витягають, а отвір у шкаралупі закривають краплею розплавленого стерильного парафіну.
Малюнок 16. Зараження в алантоїсну порожнину (перший варіант) (за Ніколау)
Другий варіант.Зроблений у шкаралупі над повітряною камерою отвір використовують лише виходу частини повітря. Отвір для самого зараження роблять ділянці безсудинної зони хорионаллантоисной оболонки (ХАО) із боку зародка. Голку вводять на глибину трохи більше 2-3 мм. Ін'єктують рідину, що інфікує, в об'ємі 0,1-0,2 мл і закривають отвір парафіном (див. рис. 17).
Зараження на хоріоналантоїсну оболонку.
Цей метод зараження курячих ембріонів частіше використовують для культивування епітеліотропних та пантропних вірусів віспи, інфекційного ларинготрахеїту птахів, чуми м'ясоїдних, хвороби Ауески, катаральної лихоманки овець та ін.
Таке зараження може бути виконане через природну або штучну повітряну камеру.
Для зараження через природну повітряну камеруембріон поміщають у штатив вертикально тупим кінцем вгору і в шкаралупі проти центру повітряної камери вирізують кругле вікнодіаметром 15-20 мм. Через це вікно пінцетом знімають підшкаралупну оболонку. На ділянку ХАО, що оголилася, наносять 0,2 мм вірусовмісної суспензії (рис. 18), отвір закривають лейкопластирем або рідше покривним склом, зміцнивши його розплавленим парафіном.
Зараження через штучну повітряну камерузастосовують частіше першого, так як воно забезпечує контакт вірусомісткого матеріалу з більшою поверхнею ХАО і, отже, веде до утворення більшої кількості вірусу.
Рисунок 17. Зараження курячого ембріона в алантоїсну порожнину (другий варіант) (за Ніколау)
Малюнок 18. Зараження на ХАО через повітряну камеру (по Ніколау та ін.)
Рисунок 19. Зараження курячого ембріона на ХАО через штучну повітряну камеру (по Ніколау та ін.)
Для зараження ембріона цим методом його поміщають штатив горизонтально зародком вгору. У шкаралупі роблять два отвори: один невеликий над центром повітряної камери (призначений для відсмоктування повітря), а інший діаметром 0,2-0,5 см збоку, з боку зародка. Складність методу в тому, що, роблячи другий отвір, необхідно обережно зняти спочатку шматочок шкаралупи, потім ковзним рухом, не пошкоджуючи ХАО, зрушити підшкаралупну оболонку в бік так, щоб через дефект, що утворився, міг пройти повітря. Після цього гумовою грушею через перший отвір відсмоктують повітря з природної повітряної камери (рис. 19 а).В результаті через бічний отвір зовнішнє повітряпрямує всередину, утворюючи штучну повітряну камеру, дном якої є ХАО (рис. 19, б).
Через бічне отвір на поверхню ХАО наносять інфекційну рідину і отвір закривають шматочком лейкопластиру. Закривати перший отвір немає необхідності, тому що внутрішній листок підшкаралупної оболонки при цьому методі зараження не порушується і продовжує виконувати роль бар'єру для мікрофлори. довкілля.
Подальшу інкубацію ембріонів, заражених цим методом, проводять у горизонтальному положенні бічним отвором.
Зараження у жовтковий мішок.
Здебільшого ним користуються для розмноження хламідій, а також вірусів хвороби Марека, ринопневмонії коней, катаральної лихоманки овець та ін. Використовують два варіанти зараження.
Перший варіант.Ембріони поміщають у штатив у вертикальному положенні. Роблять отвір у шкаралупі над центром повітряної камери та вводять голку на глибину 3,5-4 см під кутом 45° до вертикальної осі у напрямку, протилежному до місця знаходження зародка (рис. 20).
Рисунок 20. Зараження курячого ембріона в жовтковий мішок (по Ніколау та ін.)
Другий варіант.Іноді аналогічний шлях зараження здійснюється горизонтально укріпленому в штативі ембріоні; у своїй зародок перебуває унизу, а жовток з нього. Отвір у шкаралупі закривають краплею розплавленого парафіну.
Зараження в амніотичну порожнину.
Для цієї мети використовують ембріони 6 – 10-денного віку. Метод використовується при культивуванні вірусів грипу, ньюкаслської хвороби, ринопневмонії коней та ін. Є два способи зараження.
Закритий спосіб.Зараження проводять у затемненому боксі. Яйце поміщають на овоскопі в горизонтальному положенні зародком вгору. Через отвір у шкаралупі над повітряною камерою вводять голку із затупленим кінцем у напрямку зародка. Доказом того, що голка проникла в амніон, є рух тіла зародка у напрямку пересування.
Відкритий спосіб.Шкаралупу над повітряною камерою зрізають так, щоб утворилося вікно діаметром 1,5-2,5 см. Через нього пінцетом під контролем ока знімають підшкаралупну оболонку. Потім анатомічний (14 см) пінцет із зімкнутими браншами ведуть, продавлюючи хоріоналантоїсну оболонку у напрямку до зародка. Коли пінцет досягне його, бранші розмикають, захоплюють амніотичну оболонку разом з ХАО і підтягують до вікна. Утримуючи лівою рукою пінцет з фіксованою в ньому оболонкою амніону, вводять матеріал, що містить вірус (рис. 21). Далі усі оболонки опускають, вікно закривають лейкопластирем і ембріон інкубують у вертикальному положенні.
Рисунок 21. Зараження курячого ембріона в амніон відкритим способом(за Ніколау та ін.)
Зараження у кровоносні судини ХАО.
При овоскопуванні 11-13-денних ембріонів відзначають велику кровоносну судину. По його ходу видаляють ділянку шкаралупи, наносять 1-2 краплі спирту, що робить на деякий час прозорою підшкаралупну оболонку. Під контролем ока на овоскопі голку вводять у посудину, що підтверджується його рухливістю при невеликих бічних рухах голки. Голу ділянку підшкаралупної оболонки закривають шматочком лейкопластиру.
Можна матеріал в судини ввести і дещо різним способом: зрізають шкаралупу над повітряною камерою, підшкаралупну оболонку змочують спиртом і в судини ХАО, що стали видними, вводять матеріал. Отвір закривають шматочком стерильного лейкопластиру.
Описані технічні прийоми експериментального зараження курячих ембріонів єдині, а мають різні варіанти.
Зараження у тіло зародка.
Для зараження використовують ембріони 7-12-денного віку. Відомо два варіанти методу.
Перший варіант.Заражають так, як і в амніон закритим способом, З тією лише різницею, що беруть гостру голку і на овоскопі показником влучення голки в тіло вважають підпорядкування зародка рухам голки.
Другий варіант.Заражають так само, як в амніон відкритим способом: через вікно у шкаралупі підтягують пінцетом тіло зародка. Матеріал вводять у головний мозок чи певні ділянки тіла. За таких методів зараження буває значний відсоток неспецифічної загибелі ембріонів.
Накопичення вірусу в курячому ембріоні
Перед подальшою інкубацією на шкаралупі заражених будь-яким методом курячих ембріонів простим (графітним) олівцем пишуть, чим заражений ембріон і коли, якщо потрібно, те й інші відомості. Заражені курячі ембріони поміщають у термостат для подальшої інкубації, у процесі якої відбуваються репродукція внесених вірусів та їхнє накопичення у відповідних структурах. p align="justify"> Температура інкубації ембріонів варіює від 33 до 38 ° С залежно від властивостей вірусу, яким проведено зараження. За ембріонами ведуть постійне спостереження, переглядають на овоскопі, відбираючи полеглих.
Загибель ембріонів у перші 24 години після зараження найчастіше зумовлена розмноженням грибів, бактеріальної мікрофлори, внесених до ембріона разом з інокулятом, або травмуванням при зараженні. Ця загибель вважається неспецифічною. У більш пізні терміниембріони гинуть у результаті, як правило, розмноження в ембріонах вірусу. Виявивши загиблі ембріони, їх одразу переносять у холодильник з температурою 4 °С. Такі умови, з одного боку, сприяють збереженню активності вірусу, що накопичився в ембріоні, з іншого - ущільненню тканин і запустінню судин, що значно полегшує подальше розтин.
Ембріони інкубують до моменту максимального накопичення вірусу. Для кожного вірусу і навіть штаму цей термін є певним та варіює в межах від 2 до 7-8 діб. Так, для вірусу ньюкаслської хвороби штаму Н він становить 2-3 дні, для того ж вірусу штаму В - 5 днів, для вірусу інфекційного ларинготрахеїту птахів - 5 днів і т. д. Потім всі ембріони умертвляють охолодженням при 4 °С протягом не менше 3-4 год і розкривають.
Деембріновані яйця.
В основі методу лежить видалення ембріона з яйця в період, коли до його шкаралупи зсередини повністю прилягає хоріоналантоїсна оболонка. Якщо всередину такого яйця додати живильне середовище, то утворюється своєрідна культура тканини, в якій може розмножуватися вірус. Метод має низку переваг: він дозволяє отримати більш чистий вірус, ніж в аллантоісно-амніотичній рідині, що важливо для зниження алергічних властивостей вакцин, приготованих з цього матеріалу; відсутність жовткового мішка і, отже, специфічних антитіл, що містяться в ньому, дозволяє краще розмножуватися деяким вірусам. У деяких випадках цей метод дає хороші результати в діагностичних роботах, так як при ньому можна вводити великі кількості досліджуваного матеріалу, що збільшує можливість виділення вірусу.
Метод запропонував Бернкопф ще 1949 р., але через труднощі застосування широко використовується. Труднощі ці пов'язані з властивістю хоріоналантоїсної оболонки в процесі інкубації відокремлюватися від шкаралупи, що знижує цінність культури і ускладнює маніпуляції отримання вірусу та заміни живильного середовища.
Є. Гройель (1963) запровадив низку модифікацій, які дозволили усунути ці проблеми. Він запропонував використовувати 15-денні і навіть старіші яйця, які у процесі інкубації слід часто перевертати для рівномірного розвитку оболонки на шкаралупі яйця. При просвічуванні позначають межі повітряної камери. Шкаралупу відпилюють на 0,5 см вище за цю лінію, на край шкаралупної оболонки наливають розплавлений парафін (56-58 С°), який застигаючи, фіксує край яйця. Потім вирізають круглий отвірв оболонці над зародком, залишаючи навколо вузький обідок. Наступний етап – обережне видалення зародка з яйця. При цьому яйце слід утримувати в горизонтальному положенні і повільно повертати. Таким шляхом знаходять судини, що зв'язують ембріон з ХАО, і перерізають їх ножицями. Якщо яйце тримати вертикально, то зародок своєю масою відтягує оболонку, відриваючи її зазвичай в області гострого кінця яйця. Попадання навіть невеликої кількості рідини між ХАО та шкаралупою викликає повне відшарування оболонки протягом 1-2 днів.
Після видалення зародка оболонку, що вистилає яйце, кілька разів промивають фізіологічним розчином, охолодженим до 4-0 ° С, до тих пір, поки рідина не стане прозорою. Потім в порожнину яйця вводять 20 мл живильного середовища, підігрітого до 37 ° С, і яйце закривають стерильним гумовим ковпачком, попередньо зануривши його в парафін. Трубка з гумовою пробкою, вмонтована в яйце, забезпечує взяття, так і введення рідини без небезпеки бактеріального зараження. Такий біологічний об'єкт зберігає життєздатність протягом кількох днів.
За методикою Йошино та інших, порожнину деембрінованих яєць заповнюють розчином агару в розчині Хенкса. Заражають деембріновані яйця через трубку в ковпачку.
1. Будова курячого ембріона.
2. Для чого використовують курячі ембріони у вірусології?
3. Яка будова курячого ембріона, що розвивається?
Мета заняття
Ознайомити студентів із методами відбору курячих ембріонів для культивування вірусів.
Обладнання та матеріали
Курячі ембріони 9-12 денного віку інкубації, овоскоп, спиртові тампони, підставки для ембріонів, пінцети, ножиці, лейкопластир, голки, шприци, прості олівці, пробійники, голочки, таблиці, схеми, мультимедійне обладнання, презентації MS Office Power Pointна тему заняття.
Методика проведення заняття та методичні вказівкипо темі
Пояснення викладача
Культивування вірусів на курячих ембріонах є найбільш доступним і зручним методом для первинного виділення вірусу. Практика застосування цього зараження показала ряд переваг над іншими методами. Для зараження використовують ембріони 5-12-денної інкубації.
ГІДНОСТІ І НЕДОЛІКИ КУРИНИХ ЕМБРІОНІВ ЯК БІОЛОГІЧНИХ ОБ'ЄКТІВ
Культивування вірусів у курячих ембріонах – найбільш доступний та зручний метод як для первинного виділення вірусів від хворих тварин та з об'єктів зовнішнього середовища, так і для подальшого культивування вірусів у лабораторії. Цей метод широко застосовується для ідентифікації вірусів та антитіл, а також для приготування вакцин та діагностикумів. Практика застосування показала низку переваг цього методу перед культивуванням вірусів на лабораторних тваринах. Відомо, що білі миші, яких широко використовують при вірусологічних дослідженнях, можуть бути спонтанно заражені низкою вірусних інфекцій: эктромелией, лімфоцитарним хоріоменінгітом, енцефалітом Тейлора, вірусною пневмонією, вірусом Сендай та іншими, що вкрай ускладнює роботу і результатів. Культивування вірусів на курячих ембріонах значною мірою усуває зазначені вище проблеми. Поряд із цим від курячого ембріона можна отримати значно більшу кількість вірусу, ніж від лабораторних тварин. Курячий ембріон має більшу життєздатність і стійкість до різного роду впливів, неминучих при введенні досліджуваного матеріалу. При відомому навичці роботи з ембріонами та дотриманні правил асептики загибель їх незначна. Найбільший відхід ембріонів буває при введенні матеріалу в амніотичну порожнину та жовтковий мішок, але й у цих випадках вона не перевищує 10–15 %, якщо дотримано необхідних умов інкубування.
Курячі ембріони як жива система увійшли у вірусологічну практику у 30-х роках XX ст. Їх використання розширило спектр культивованих в лабораторних умовах вірусів, дозволило більш успішно вирішувати задачі, що стоять перед вірусологією у зв'язку з тим, що курячі ембріони мають ряд переваг перед лабораторними тваринами: 1)шкаралупа і підшкаралупна оболонка надійно захищають ембріон від бактеріального зараження з боку в 2) важливою перевагою ембріонів є також їхня висока чутливість до широкого спектру вірусів, що пояснюється недостатнім розвитком захисних механізмів; 3) курячі ембріони легкодоступний об'єкт у зв'язку з розвитком широкої мережі птахофабрик та інкубаторіїв; 4) курячі ембріони економічні, не вимагають догляду та годування.
Основними недоліками є: 1) неможливість повністю гарантувати стерильність цієї живої системи, оскільки ембріони можуть нести у своєму вмісті віруси та інші патогенні агенти (віруси інфекційного бронхіту курей, ньюкаслської хвороби, грипу, лейкозу, хламідії та мікоплазми). Їхня присутність може спотворювати результати дослідження; 2) курячі ембріони чутливі не до всіх вірусів.
ЦІЛІ ВИКОРИСТАННЯ КУРИНИХ ЕМБРІОНІВ
Використовують курячі ембріони у вірусології в основному для тих же цілей, що й лабораторних тварин, а саме:
- Виявлення в патматеріалі активного вірусу біопробою;
– первинного виділення вірусу. Ефективно виділяють та культивують на курячих ембріонах віруси, що викликають захворювання у птахів, а також деякі віруси ссавців;
– підтримки вірусів у лабораторії;
– титрування вірусів;
– накопичення вірусу для лабораторних досліджень та отримання вакцин;
– як тест-об'єкт у реакції нейтралізації.
ВИМОГИ ДО КУРИНИХ ЕМБРІОНІВ
Яйця необхідно отримувати з благополучних з вірусних хвороб господарств. У запліднених яйцях навіть від клінічно здорових курей можуть знаходитися різні віруси, що зустрічаються у цих птахів: ньюкаслської хвороби, інфекційного бронхіту, інфекційного ларинготрахеїту, енцефаломієліту, парагрипу-2, поліартриту, віспи, арбовіруси, вірусів, аденовірус. , призвести до діагностичних помилок, з другого, з урахуванням явища інтерференції, – до придушення розмноження вірусу, що у досліджуваної пробі. Ембріони, що не містять вірусу, але отримані від курей, безсимптомно заражених певними вірусами, також можуть бути менш чутливими або абсолютно нечутливими до дії цього вірусу завдяки наявності специфічних антитіл, отриманих від матері з жовтком. Для вдалого виділення вірусу необхідно, щоб кури, ембріони яких використовують у роботі, були вакциновані проти хвороби, збудника якої шукають. Шкаралупа яєць має бути непігментованою, чистою (мити не можна). Вік ембріона має відповідати обраному методузараження.
Для забезпечення нормального розвитку зародків у запліднених яйцях в період інкубації необхідно дотримуватись певної температури та вологості. Ембріони, що розвиваються, переносять перегрів значно гірше, ніж охолодження. Тому короткочасна (протягом кількох годин) поломка в системі обігріву не завдає великої шкоди. При тривалішій перерві необхідний підігрів.
Інкубовані яйця потребують вільного доступу свіжого повітрящо надходить через віддушини. Вони мають бути завжди відкритими. Одне яйце, як прийнято вважати, витрачає 1 л кисню на день, що не дивно, якщо згадати бурхливий розвиток зародка протягом 21 дня інкубації. Саме тому яйця не можна класти впритул, а також одне на інше. Для інкубації яєць непридатні нормальні термостати. Лише у разі крайньої необхідності їх можна використовувати для цих цілей, але при цьому часто провітрювати і поставити всередину посудину з водою для забезпечення необхідної вологості.
Закладені на інкубацію яйця через 3–5 днів просвічують за допомогою спеціальної настільної або ручної (якщо яйця не виймають із лотка інкубатора) лампи, щоб відібрати незапліднені. Найбільш зручні для вірусологічних робіт яйця леггорнів, так як їхня тонка біла шкаралупа дозволяє краще розглянути вміст. Незаплідні або яйця, що містять загиблих зародків, з інкубатора видаляють. Частка запліднених яєць коливається у значних межах залежно від багатьох факторів, у тому числі від пори року: навесні вона найвища, взимку найнижча.
Вдруге зародки просвічують у день запланованого зараження. Термін цей залежить від виду вірусу, а також шляхів його введення. На шкаралупі звичайним (не чорнильним) олівцем відзначають місце зараження.
БУДОВА КУРИНОГО ЕМБРІОНУ
Зазвичай курка відкладає запліднене яйце, в якому зародок знаходиться на стадії бластули або ранньої гаструли. При нагріванні яйця до температури, близької температури тіла курки, відбувається подальший розвитокзародка (рис. 15). У період з 5 по 12 день інкубації курячі ембріони можуть бути використані для зараження вірусами.
Рисунок 15 – Схематичний розріз курячого ембріона на 8-й день інкубації: 1 – шкаралупа; 2 – підшкаралупна оболонка; 3 – хоріоналантоїсна оболонка; 4 – алантоїсна порожнина; 5 – жовтковий мішок; 6 – білок; 7 – повітряна камера; 8 – тіло зародка; 9 – амніотична порожнина
Яйце з курячим ембріоном, що розвивається, покрите зовні твердою пористою шкаралупою, до якої щільно прилягає підшкаралупна оболонка. Остання у тупому кінці яйця поділяється на два листки, між якими утворюється повітряна камера. Тіло зародка лежить у яйці ексцентрично, спиною ближче до шкаралупи, голова спрямована у бік повітряної камери. Зародок занурений у навколоплідну рідину, що заповнює амніотичну порожнину, та пуповиною пов'язаний із жовтком. Жовток також розташовується ексцентрично і щодо зародка по інший бік поздовжньої осі.
Безпосередньо під підшкаралупною оболонкою знаходиться алантоїсна порожнина, що покриває амніон і жовтковий мішок, а до 10-11 дня замикається в гострому кінці яйця. У процесі розвитку алантоїсна оболонка зростається з хоріоном, утворюючи єдину хоріоналантоїсну оболонку (ХАО). У гострому кінці яйця є залишок білка.
Зараження у ту чи іншу частину ембріона проводиться в період її максимального розвитку, коли кількість чутливих клітин буде найбільшою.
У процесі інкубації змінюються розміри зародкових структур, що пояснюється їх функціональним призначенням і визначає оптимальний для зараження вік ембріона.
Так, жовтковий мішок як резервуар поживних речовинмає найбільший обсяг на початку інкубації, а потім (після 12 дня) у міру розвитку зародка він зменшується. Заражають у жовтковий мішок з 5-го по 7-й день інкубації.
Амніотична порожнина, будучи буферним середовищем розвитку зародка, покриває його на 5-й день інкубації. Середня кількість рідини на середину періоду інкубації становить близько 1 мл.
Для зараження в амніотичну порожнину використовують ембріони віком 6-10 днів.
Алантоїсна порожнина служить для збору продуктів обміну, в ній накопичуються сечокислі солі, фосфорні та азотисті сполуки. У процесі зростання та розвитку зародка алантоїсна рідина набуває кислої реакції. максимальних розмірівалантоїсна порожнина досягає на 9-12-й день розвитку ембріона, тому зараження в алантоїсну порожнину проводять переважно на 9-11-й день інкубації.
Хоріоналантоїсна оболонка багата на кровоносні судини, які, тісно прилягаючи до внутрішньої поверхні пористої шкаралупи, насичуються киснем і забезпечують їм тіло зародка, виконуючи функцію органу дихання ембріона. Максимального розвитку ХАО досягає 11-13-й день. Зараження на хоріоналантоїсну оболонку проводять на 10-12-й день інкубації.
ПІДГОТОВКА КУРИНИХ ЕМБРІОНІВ ДО ЗАРАЖЕННЯ
Ембріони доставляють з інкубаторію, не допускаючи їх охолодження в дорозі. У лабораторії ембріони інкубують у термостаті при температурі 37 °С та вологості 60-70 %, що досягається встановленням у термостаті відкритих широкогорлих судин з водою. Вентиляційні отворитермостат повинні бути відкриті. Ембріони розміщують повітряною камерою вгору у спеціальних штативах. Рекомендується до моменту зараження дати можливість ембріонам протягом доби адаптуватися до нових умов та нормалізувати свої функції після транспортного стресу. Якщо лабораторія має власний інкубаторій, то знесені куркою запліднені яйця придатні для закладання в нього протягом 10 днів.
Підготовка курячих ембріонів до зараження включає овоскопію та дезінфекцію шкаралупи, а також відповідну підготовку робочого місця. Овоскопування є перегляд яєць проти досить яскравого джерела світла (овоскоп), внаслідок чого на неосвітленому боці шкаралупи утворюються тіні від внутрішніх структур (рис. 16). Овоскопування проводять у затемненому приміщенні. При цьому на шкаралупі графітним олівцем відзначають кордон повітряної камери, місце розташування зародка і ділянку безсудинної зони розміром 0,5x0,5 см. Ці позначки служать орієнтиром при виборі місця введення матеріалу, що містить вірус. При овоскопуванні також визначають, чи живий зародок чи загинув. Зародків, що виявляють активні рухипри добрій кровонаповненості судин ХАО, вважають живими.
Малюнок 16 – Овоскопування курячого ембріона на 10-ту добу інкубації. Видно тіні: 1 - зародка; 2 – жовткового мішка; 3 – кровоносних судин ХАО; 4 – повітряної камери; 5 – білка
Курячі ембріони заражають в асептичних умовах (краще у боксі). У передбокснику шкаралупу ембріонів обробляють йодованим спиртом, потім уже у боксі повторно протирають, а іноді ще й фламбують – обробляють полум'ям змоченого спиртом тампону.
Ембріони фіксують у спеціальних підставках, встановлених в емальованій кюветі на 3–4-шаровій марлевій серветці, змоченій розчином, що дезінфікує.
Діяльність використовують інструменти, стерилізовані кип'ятінням. Їх ставлять у баночку зі спиртом та обпалюють полум'ям пальника перед кожним повторним використанням.
Демонстрація
а) клінічних ознак захворювання у заражених лабораторних тварин; б) методів умертвіння лабораторних тварин; в) техніки розтину (звертають увагу студентів на стан внутрішніх органів) та прийомів отримання вірусомісткого матеріалу; г) техніки виготовлення відбитків мозку; д) дій щодо знезараження робочого місця та трупа після розтину зараженої тварини.
Завдання
1. Вивчити будову курячого ембріона.
2. Провести овоскопію курячого ембріона, визначити його життєздатність та відзначити межі тіней природних утворень.
3. Підготувати курячі ембріони до зараження.
Самостійна роботастудентів
а) розпізнавання за кольоровою міткою заражених кожним із студентів мишей, аналіз їх клінічного стану, умертвіння, фіксація у кюветі з восковим (парафіновим) дном, розтин; б) аналіз патологоанатомічних змін, отримання вірусомісткого матеріалу (паренхіматозних органів), приготування пошарових відбитків мозку.
Студенти проводять овоскопію курячого ембріона, визначають його життєздатність та відзначають межі тіней природних утворень.
Підбиття підсумків заняття
Завдання до наступного заняття
Контрольні питання
1. Будова курячого ембріона.
2. Для чого використовують курячі ембріони у вірусології?
3. Яка будова курячого ембріона, що розвивається?
Ембріони використовують у віці від 8 до 14 днів, залежно від виду вірусу, способу зараження. Розмноження в курячих ембріонах відбувається в різних частинах зародка. Способи зараження: на хоріоналантоїсну оболонку, в аллотоїсну та амніотичну, жовтковий мішок, тіло ембріона.
29. Тканинні культури.
Залежно від техніки приготування 3 види клітин:
Одношарові здатні розмножуватися на поверхні хімічно нейтрального скла у вигляді моношару;
Суспензійні, розмн-я у всьому обсязі живильного середовища;
Органно-цілісні шматочки органів і тканин, що зберігають вихідну структуру.
Приготування первинної культури клітин складаються з кількох етапів: подрібнення тканини, роз'єднання клітин, відмивання суспензії отриманої від трипсину.
Індикація:
- цитопатічна дія-видимі під мікроскопом морфологічні зміни клітин, аж до відторгнення від скла.
Вірусні включення - це скупчення вірусних частинок або відділення компонентів вірусів у цитоплазмі чи ядрі клітин.
Бляшки-обмежені ділянки, що складаються з дегенеративних клітин. Вони помітні як світлі плями на тлі пофарбованих клітин.
Кольорова проба
Гемадсорбція – здатність культур клітин адсорбувати на своїй поверхні еритроцити.
Інтерференція.
30.Класифікація, хім.Склад бактеріофагів.
Бактеріофаги-віруси бактерій, що мають здатність проникати в бактеріальні клітини, викликати їх розчинення. Мають форму пуголовка, деякі кубічної ниткоподібної форми. Складаються з ікосаедричної головки та хвостого відростка. Усередині хвостого відростка циліндричний стрижень, зовні - чохол, відросток закінчується шестикутною базальною платівкою з короткими шипами. Фаги складаються з нуклеїнової кислоти та білка. У фагів, що мають форму сперматозойду, двониткова ДНК щільно упакована у вигляді спіралі всередині головки. Білки входять до складу оболонки. Крім структурних білків виявлено внутрішні білки, пов'язані з нуклеїновою кислотоюта білки-ферменти, що беруть участь у взаємодії фага з клітиною.
31. Процес взаємодії вірулентних фагів та чутливої до них бактеріальної клітини
Вірулентні фаги можуть лише збільшуватися у кількості за допомогою літичного циклу. Процес взаємодії вірулентного бактеріофага з клітиною складається з кількох стадій: адсорбції бактеріофага на клітині, проникнення в клітину, біосинтезу компонентів фага та їх збирання, виходу бактеріофагів із клітини.
Спочатку бактеріофаги прикріплюються до фагоспецифічних рецепторів на поверхні бактеріальної клітини. Хвіст фага за допомогою ферментів, що знаходяться на його кінці (в основному лізоциму), локально розчиняє оболонку клітини, скорочується і ДНК, що міститься в головці, ін'єктується в клітину, при цьому білкова оболонка бактеріофага залишається зовні. Ін'єктована ДНК викликає повну перебудову метаболізму клітини: припиняється синтез бактеріальної ДНК, РНК та білків. ДНК бактеріофага починає транскрибуватися за допомогою власного ферменту транскриптази, який після потрапляння до бактеріальної клітини активується. Синтезуються спочатку ранні, а потім пізні іРНК, які надходять на рибосоми клітини-господаря, де синтезуються ранні (ДНК-полімерази, нуклеази) та пізні (білки капсиду та хвостового відростка, ферменти лізоцим, АТФаза та транскриптаза) білки бактеріофага. Реплікація ДНК бактеріофага відбувається за напівконсервативним механізмом і здійснюється за участю власних ДНК-полімераз. Після синтезу пізніх білків та завершення реплікації ДНК настає заключний процес – дозрівання фагових частинок або з'єднання фагової ДНК з білком оболонки та утворення зрілих інфекційних фагових частинок.
Виділення вірусів на лабораторних тваринах.
Вибір лабораторних тварин залежить від виду вірусу. Лабораторні тварини є біологічною моделлю. Іноді доводиться проводити 3-5 сліпих, безсимптомних пасажів, перш ніж вдасться адаптувати вірус до лабораторних умов. Однак, до деяких вірусів лабораторні тварини не чутливі, в цьому випадку доводиться використовувати природно сприйнятливих тварин. Як, наприклад, при чумі свиней та інфекційної анемії коней.
Мета зараження лабораторних тварин:
1. Вивчити патогенез хвороби;
2. Виділити вірус із пат.матеріалу;
3. Напрацювання імунних та гіперімунних сироваток;
4. Напрацювання вакцин;
5. Підтримка вірусів за умов лабораторії;
6. Титрація з метою визначення кількості вірусу в одиниці обсягу;
7. Біологічна модель для постановки реакції нейтралізації;
Вибір способу зараження лабораторних тварин залежить від тропізму вірусу. Так, при культивуванні нейротропних вірусів тварин заражають у мозок; респіраторних інтранозально, інтратрахеально; дерматропних – підшкірно та внутрішньошкірно.
Зараження проводять з дотриманням правил асептики та антисептики.
Розрізняють багато способів введення вірусомісткого матеріалу в організм тварин:
Підшкірний; - інтрацеребральний; - внутрішньошкірний;
Інтраперитоніальний; - внутрішньом'язовий; - інтраокулярний;
внутрішньовенний; - інтранозальний; - аліментарний;
Після зараження тварин мітять, поміщають в ізольований бокс і ведуть спостереження протягом 10 діб. Загибель тварини в першу добу після зараження вважається неспецифічною і надалі не враховується.
3 ознаки вказують на результативність зараження:
Наявність клінічних ознак
Загибель тварини
Патологоанатомічні зміни (величини, форми, кольори та консистенції органу).
Курячий ембріон – це запліднене курине яйце, у якому розвивається зародок (ембріон) Культивування вірусів на курячих та перепелиних ембріонах Останнім часомнабуло широкого поширення як одного з найбільш простих і надійних методів культивування та діагностики багатьох вірусів та деяких бактерій - бруцели, рикетсії, вібріони.
Багато вірусів людини і тварин здатні культивуватися в курячих ембріонах, що розвиваються. Ембріональна тканина, особливо оболонки ембріона, багаті на тканини зародкового епітелію, є сприятливим середовищем для розмноження багатьох вірусів. Віруси, що мають епітеліотропні властивості (віспа, ІЛТ та ін.), успішно розвиваються на хоріоналантоїсній мембрані, викликаючи макроскопічно видимі зміни. Різні представникиміксовірусів (грип, хвороба Ньюкасла, чума м'ясоїдних та ін), віруси інфекційного бронхіту, гепатиту каченят, арбовіруси та ін добре розмножуються в ембріоні при введенні матеріалу в алантоїсну порожнину. Деякі віруси успішно культивуються у жовтковому мішку.
Переваги:
1. Економічно вигідно, крім того, яйця легко доступні;
2. У курячих ембріонів, що розвиваються, відсутні захисні механізми, т.к. система імунітету ще не розвинена;
3. Шкаралупа яєць перешкоджає проникненню через неї бактерій та вірусів із навколишнього середовища;
Для культивування та виділення вірусів на курячих ембріонах потрібно дуже нескладне обладнання – звичайний термостат чи інкубатор.
Умови:
1. Яйця одержують із господарств свідомо благополучних по інфекційним захворюванням;
2. Курячі ембріони краще отримувати від білих порід курей (леггорн, російська біла), тому що вони стійкіші до маніпуляцій і не гинуть від невеликих травм. Крім того, у них шкаралупа біла і прозоріша, ніж у інших порід, і легше просвічується, що зручно для перегляду та спостереження в процесі роботи з ними;
3. Для інкубування відбирають запліднені яйця, знесені не більше 10 діб тому;
4. Беруть незабруднені яйця, тому що мити їх перед інкубуванням не можна, а брудні яйця гірше просвічуються при перегляді (овоскопії) і при роботі з ними можна інфікувати ембріон у процесі маніпулювання;
Інкубують яйця в інкубаторі або термостаті з водяним нагріванням і доступом повітря, причому в процесі інкубації в термостаті яйця 2-3 рази на добу потрібно перевертати і для кращого газообміну виймати на 5-10 хвилин на повітря. Для підтримки певної вологості термостат ставлять посудину з водою для випаровування, температура в термостаті повинна бути 38°.
Розвиток зародка відбувається в першу добу інкубування, відбувається закладка мозку, скелета. Будова курячого ембріона у віці 7-9 днів(Див. зошит).
Для зараження найчастіше використовують ембріони 7-12 добового віку. Роботу з курячими ембріонами проводять у стерильній кімнаті-боксі із найсуворішим дотриманням асептики.
Мета зараження курячих ембріонів:
1. Виділити вірус із пат.матеріалу;
2. Напрацювання вакцин;
3. Підтримка вірусу за умов лабораторії;
4. Титрація вірусів;
5. Біологічна модель для постановки реакції нейтралізації;
6. Вивчення інтерференції вірусів та напрацювання інтерферону; Зараження курячих ембріонів:
Для зараження слід відбирати життєздатні ембріони з добре вираженою рухливістю. Перед зараженням усі ембріони ретельно переглядають у затемненій кімнаті на овоскопі.
Під час просвічування ембріонів перед зараженням на шкаралупі простим олівцем описують ляк (повітряну порожнину), перебіг великих кровоносних судин і місце передлежання ембріона, т. е. ділянку на шкаралупі, де найближче до неї лежить ембріон. Відмітка пуги, місця передлежання ембрірну і ходу великих кровоносних судин потім служать орієнтиром при виборі місця введення матеріалу, що містить вірус в момент зараження.
Відібрані для зараження курячі ембріони переносять у бокс, де й проводять із нею роботу. Перед зараженням шкаралупу за місцем введення матеріалу двічі обробляють йодованим спиртом та обпалюють. Доза зараження становить 01-02 см.
Залежно від виду вірусу та мети зараження є різні методи введення вірусомісткого матеріалу:
1) Зараження на хоріоналантоїсну оболонку , використовують ембріони 7-12-добового віку при виділенні та культивуванні нейротропних, дерматропних та деяких пантропних вірусів (віспа, енцефаломієліт, ІЛТ, ящур, сказ, чума та ін.). Існує 3 варіанти зараження:
а) розкривають ляк і зрізають її ножицями, відокремлюють підшкаралупну оболонку і наносять на хорионаллантоисную оболонку (ХАО) матеріал. Отвір у яйці потім закривають стерильним скляним ковпачком і краї ковпачка парафінують;
б) випиляють надфілем (напильничок) або зазубреним скальпелем у шкаралупі трикутник з довжиною сторін близько 1 см на межі ґудзика з боку передлежання ембріона, пінцетом видаляють ділянку шкаралупи та підскордупної оболонки і вводять матеріал. Отвір закривають покривним стерильним склом і краї парафінують або заклеюють стерильним лейкопластирем.
в) скальпелем видаляють невелика ділянкашкаралупи площею близько 0,5 см за місцем передлежання ембріона, потім пінцетом або голкою видаляють у цій ділянці підшкаралупну оболонку та вводять матеріал. Якщо матеріал погано входить у порожнину яйця, можна за допомогою гумової груші через отвір у шкаралупі на пузі відкачати повітря з ґудзика і в результаті за місцем введення матеріалу утворюється штучний ляк і тоді матеріал легко вводиться. Отвір у шкаралупі закривають лейкопластирем або парафінують.
2) Зараження в алантоїсну порожнину. Цей метод зараження дуже простий і застосовується виділення багатьох вірусів. Для зараження беруть 10-11-денні ембріони. Є два варіанти зараження:
а) зараження проводять через клям, не зрізуючи його. Голкою відміряють відстань від верхівки пуги до межі пуги, позначеної олівцем на шкаралупі, і вводять голку на зазначену глибину і поглиблюють ще на 0,5 см, щоб проколоти хоріоналлантоісну оболонку;
б) вводять матеріал голкою через прокол у шкаралупі у місці передлежання ембріона на глибину 3-5 мм у ділянці без судин. Отвір у шкаралупі закривають лейкопластирем або парафінують.
3) Зараження у жовтковий мішок. Для зараження використовують 5-8-добові ембріони. Існує два варіанти зараження:
а) голку вводять з боку ляка в жовтковий мішок під кутом 45° до місця передлежання ембріона під контролем овоскопа;
б) яйце кладуть на підставку також місцем передлежання ембріона вниз і вводять голку зверху вниз у напрямку до ембріона на глибину близько 1 см.
Місце введення заклеюють лейкопластирем та парафінують. 4) Зараження в амніотичну порожнину.При цьому методі зараження вірус може проникнути в різні клітини, що перебувають у контакті з амніотичною рідиною, та розмножуватись у них. Для зручності зараження рекомендується за 2-3 дні до проведення зараження ембріони інкубувати пугою вгору. Тоді ембріон та амніон зміщуються вгору та зручніше заражати. Є два варіанти зараження:
а) розкривають і зрізають ляк, пінцетом видаляють підшкаралупну оболонку і захоплюють амніону підтягують амніон пінцетом і вводять в амніотичну порожнину матеріал у дозі 0,1 мл. Отвір у шкаралупі потім закривають стерильним скляним ковпачком та краї парафінують;
б) зараження за допомогою довгої голки через клям у темній кімнаті під контролем ока, У голки попередньо вістря загинають під прямим кутом, щоб вийшов маленький майданчик. Голку вводять під контролем ока через кнут доембріона, під тиском затупленої голки ембріон у цьому випадку зміщуватиметься, потім легким поштовхом проколюють амніон і голку злегка відтягують назад. При цьому ембріон повинен зміщуватися за голкою нагору. Потім матеріал вводять.
5) Зараження у тіло ембріона та зараження у головний мозок. Використовуються 7-12-денні ембріони, зараження проводять введенням матеріалу різні ділянки тіла або безпосередньо в головний мозок. Для зараження розкривають ляк і підтягують пінцетом ембріон. При цих методах зараження може бути загибель ембріонів від травми до 30% і більше заражених.
6) Зараження у великі кровоносні судини хоріоналантоїсної оболонки. Цей метод зараження, як і попередній, застосовується вкрай рідко. Матеріал вводять тонкою голкою після видалення шкаралупи протягом кровоносної судини безпосередньо в судину по току крові.
Після зараження курячі ембріони обов'язково мітять простим олівцем і ставлять у термостат. За ними щодня спостерігають шляхом перегляду, спостереження ведуть до 7-8 днів, залежно від виду вірусу. У разі загибелі ембріонів їх терміново видаляють із термостату та ставлять у холодильник до моменту розтину. Якщо ембріон загинув протягом перших 14-18 годин, то це може бути від травми або токсичності патматеріалу. Тому, так само як і при зараженні лабораторних тварин, у сумнівних випадках рекомендується робити кілька пасажів та в досвід брати на кожен матеріал по кілька ембріонів.
Розтин загиблих заражених курячих ембріонів, або вилучених після закінчення терміну спостереження, проводиться з усіма правилами асептики в стерильних умовах боксу. При розтині шкаралупу обробляють спиртом і обпалюють, потім зрізають ляк. У розкритого ембріона спочатку ретельно відсмоктують алантоїсну рідину (кількість її близько 7 мл), потім пінцетом відтягують амніотичну оболонку, проколюють пастерівською піпеткою і відсмоктують амніотичну рідину (кількість її 1,0-1,5 мл), потім збирають жовток, ембріон. Рідина, оболонки та сам ембріон ретельно оглядають наявність змін. Амніотична рідина в нормі абсолютно прозора, при зараженні вона може бути каламутна, кров'яниста. Характерні зміни, викликані вірусом, бувають найбільш вираженими на хорионаллантоисной оболонці: з'являються запальні вогнища, непрозорі, круглої форми та крововиливу. Крововиливи можуть бути на тілі ембріона. Весь матеріал збирають у стерильний посуд.
Курячі ембріони у вірусології широко застосовуються не тільки для виділення вірусів, але і для накопичення та отримання антигенів, для приготування живих та вбитих вакцин, титрування вірусів, для постановки реакції нейтралізації вірусів, для атенуювання (ослаблення) вірусів, для вивчення інтерференції вірусів та отримання .
Виділення та культивування вірусів
Виділення та ідентифікація збудника – «золотий стандарт» у діагностиці вірусних інфекцій.
Культури клітин
Віруси розмножуються тільки в живих клітинах, і виділення збудника у зараженій культурі клітин – один із основних методів діагностики вірусних інфекцій. Оскільки більшість патогенних вірусів відрізняє тканинна та типова специфічність, то майже до кожного вірусу можна підібрати відповідні клітинні чи тканинні культури, а також створити стандартні умови культивування (наявність клітин одного типу). Розмноження вірусу забезпечують чутливі (пермісивні) клітини. Тому при виділенні невідомого збудника проводять одномоментне зараження 3-4 культур клітин, припускаючи, що одна з них може бути пермісивною. Культури клітин отримують диспергуванням відповідних органів прокуратури та тканин, але частіше використовують ембріональні тканини (людини і тварин) чи трансформовані пухлинні клітини. При приміщенні відповідну плоску поверхню клітинні культури зазвичай ростуть у вигляді моношару.
Первинно-трипсинізовані культури.Суспензії клітин одержують гомогенізацією відповідних тканин, попередньо оброблених трипсином. Культури часто представлені клітинами змішаного типута не підлягають повторному культивуванню. Життєздатність таких культур становить 2-3 тижні.
Напівперевиваються лінії клітинпредставлені диплоїдними клітинами людини та тварин. Культури обмежено придатні до повторного диспергування та зростання (як правило, не більше 20-30 пересівань), зберігаючи при цьому життєздатність і не піддаючись спонтанній трансформації.
Лінії клітин, що перевиваються(гетероплоїдні культури) представлені клітинами, підданими тривалому культивуванню та спонтанним трансформаціям. Культури здатні до багаторазового диспергування та перевивання. Робота із нею менш трудомістка проти приготуваннями первинних культур; клітини, що перевиваються, відносно однакові за своєю морфологією і стабільні за властивостями.
Культури органів
Не всі види клітин здатні рости у вигляді моношару, в деяких випадках підтримка диференційованих клітин можлива лише в культурі органу. Зазвичай це суспензія тканини, що має спеціалізовану функцію, також позначається як культура тканини, що переживає.
Курячі ембріони (мал. 1-20) - практично ідеальні моделі для культивування деяких вірусів (наприклад, грипу та кору). Замкнена порожнина ембріона перешкоджає проникненню мікроорганізмів ззовні, а також розвитку спонтанних вірусних інфекцій. Ембріони застосовують для первинного виділення вірусів із патологічного матеріалу; для пасування та збереження їх, а також для отримання необхідних кількостейвірусу. Деякі збудники (наприклад, герпесвірус) викликають характерні зміни (за ними можна розпізнавати захворювання). Зараження проводять на хоріон-алантоїсну оболонку, в амніотичну або алантоїсну порожнину або в жовтковий мішок.
Зараження на хоріон-алантоїсну мембрану.Зазвичай використовують 10-12-добові ембріони. Яйця переглядають у світлі, відзначають локалізацію повітряного мішка і вибирають область без судин. Обережно видаляють фрагмент шкаралупи, звільняють зовнішню оболонку та відшаровують її обережним натисканням. Потім роблять отвір біля краю повітряного мішка. При відсмоктуванні через цей отвір хоріон-алантоїсна оболонка відшаровується від зовнішньої оболонки. На неї наносять досліджуваний матеріал, вільний від бактерій та найпростіших (пропущений через бактеріальні фільтри та оброблений бактерицидами).
Зараження в амніотичну порожнину.Зазвичай використовують 7-14-добові ембріони, у яких після відшарування хоріон-алантоїсної оболонки (див. вище) розширюють отвір, захоплюють пінцетом амніотичну оболонку і виводять через хоріон-алантоїсну оболонку. Через неї в амніотичну порожнину вводять матеріал, що досліджується.
Зараження в алантоїсну порожнину. 10-добові ембріони заражають через отвори, зроблені в шкаралупі та оболонках, що підлягають (див. вище).
Зараження у жовтковий мішок.Використовують 3-8-добові ембріони, у яких у цьому віці жовтковий мішок займає майже всю порожнину яйця. Зараження проводять через отвір, зроблений у повітряному мішку
Спостереження та облік результатів.Як вірус містить матеріалу можна використовувати вміст жовткового мішка, алантоїсну та амніотичну рідини або весь ембріон, нарізаний разом з оточуючими.
тканинами на шматочки. Рис. 1-20.Схематичне зображення
характерних поразок на хоріон- курячого ембріона, що розвивається.
алантоїсної мембрани видаляють шкаралупу
та зовнішню оболонку. Потім мембрану витягають і поміщають у стерильну воду. Характер поразок вивчають темному тлі.
Тварини моделі
При неможливості виділити та ідентифікувати вірус стандартними методами in vitroінфекційний матеріал вводять чутливим до збудника тварин, після розвитку типового інфекційного процесу проводять повторне зараження чутливих клітинних культур. Найчастіше використовують мишей, кроликів та мавп; для виділення деяких вірусів (наприклад, вірусів Коксакі) заражають мишенят-сусунків. Внаслідок дорожнечі та складності утримання лабораторних тварин практично повсюдно їх витіснили клітинні культури. Тим не менш, тваринні моделі активно використовують для вивчення особливостей патогенезу та формування імунних реакцій при вірусних інфекціях.